Identificación Molecular de Especies de Entamoeba en Muestras Fecales Provenientes de Pacientes del Anexo Pediátrico Del “Hospital Luis Razetti” de Barcelona, Estado Anzoátegui y su Relación con Síntomas Clínicos.

Abstract

En esta investigación se planteó detectar por nested PCR las especies de Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar y Entamoeba moshkovskii en muestras fecales provenientes de pacientes del Anexo Pediátrico del Hospital “Dr. Luis Razetti” de Barcelona, estado Anzoátegui y su relación con síntomas clínicos. Para ello, de un total de 1 141 muestras de heces analizadas en dicho Laboratorio durante enero-agosto 2009, se muestrearon 150 heces de niños de 0-10 años y ambos sexos, diagnosticados coproparasitológicamente positivos a E. histolytica. Adicionalmente se obtuvo información de las características físicas de las muestras, signos y síntomas al momento del muestreo y el reporte de todos los helmintos y protozoarios intestinales identificados microscópicamente en cada una de las muestras evaluadas. Estas fueron colocadas en amortiguador fosfato salino (PBS) hasta su posterior procesamiento. A todas las 150 muestras se les realizó extracción de ADN genómico empleando el kit de extracción de ADN Wizard Genomic® de Promega y se aplicó la nested PCR amplificando la secuencia de ARNr 16S para detectar el género Entamoeba (898 pb) e identificar las especies E. histolytica, E. dispar y E. moshkovskii con fragmentos de 439 pb, 174 pb y 553 pb, respectivamente. La asociación de las variables edad, sexo, sintomatología y características macroscópicas de las heces, con respecto a las especies de Entamoeba identificadas, fueron asociadas a través de la prueba Chi-cuadrado, utilizando el paquete estadístico SPSS versión 11,5. Los resultados demostraron una frecuencia de diagnóstico de E. histolytica del 13,15% en el centro asistencial evaluado (150/1 141), de las heces positivas a E. histolytica el 79,30% de las mismas presentó esta especie como único patógeno, 19,30% de los casos de E. histolytica estaban coinfectados con otros protozoarios como Giardia duodenalis, Blastocystis hominis, Entamoeba coli y Chilomastix mesnili y el 1,40% estuvo acompañada con helmintos intestinales como Trichuris trichiura e Hymenolepis nana. Sin embargo, cuando estas muestras positivas se analizaron por nested PCR se demostró que sólo el 28,00% (42/150) de las mismas presentaron infecciones por Entamoeba, evidenciándose elevado sobrediagnóstico de E. histolytica (72,00%) en la población infantil evaluada. Además, el método molecular permitió diferenciar 29 infecciones por E. histolytica (19,30%), 6 (4,00%) por E. dispar, y 7 (4,70%) infecciones mixtas E. histolytica/E. dispar. No se observó amplificación de la especie E. moshkovskii en las muestras evaluadas. Por otro lado, según los signos y síntomas de los niños evaluados, la diarrea fue el más común de estas infecciones, seguido de dolor abdominal y fiebre; sin embargo, tanto E. histolytica como E. dispar fueron identificadas en los mismos grupos de individuos sintomáticos. De igual forma, las características macroscópicas de las heces no mostró un patrón característico de especies y a pesar de que la presencia de sangre demostró una asociación estadísticamente significativa con E. histolytica, en algunas infecciones por E. dispar también se reportó presencia de sangre en la materia fecal. En conclusión, la técnica de PCR evidenció ser más útil en la detección e identificación de las especies del género Entamoeba, demostrando que el diagnóstico coproparasitológico genera sobrediagnóstico de la especie patógena E. histolytica, la cual está asociada estadísticamente a la presencia de sangre en las heces.