Efecto del Tratamiento Fotodinámico con Azul de Toluidina O en Biopelículas de Pseudomonas aeruginosa Aisladas de Pacientes Atendidos en el Hospital Universitario “ANTONIO PATRICIO DE ALCALÁ”

Abstract

Se evaluó el efecto del tratamiento fotodinámico (TFD) en cepas de P. aeruginosa formadoras de biopelículas. A 26 aislados de P. aeruginosa provenientes de muestras clínicas se les determinó la presencia de exopolisacárido para la formación de estas comunidades microbianas a través de la siembra en agar tripticasa de soja suplementado con 0,02% del indicador rojo Congo y la formación de biopelículas se determinó mediante la prueba cuantitativa de microplaca. Las cepas con mayor capacidad de formar biopelículas se sometieron a diferentes concentraciones de azul de toluidina O (25, 50, 100 y 200 μg·ml-1) y a radiación con un láser de Helio–Neón en tiempos de 2 y 4 min. El TFD se aplicó en las biopelículas usando las diversas concentraciones del colorante en combinación con el láser en los dos tiempos señalados. El efecto del tratamiento se evaluó a través del contaje de unidades formadoras de colonias y con microscopía electrónica de barrido (MEB) para visualizar alguna alteración en la morfología de las biopelículas. A través del método de rojo Congo se obtuvieron 18 cepas (69,23%) productoras de exopolisacárido (fenotipo colonias blanco-rosadas) y 8 (30,77%) no productoras de exopolisacárido (fenotipo colonias rojas). En la prueba de microplaca todas las cepas formaron biopelículas fuertes, evidenciada por la presencia de anillos adheridos a las paredes de los pocillos teñidos con cristal violeta. El uso de la radiación láser y las concentraciones del colorante de manera independiente no tuvieron un efecto marcado sobre la disminución de la viabilidad de las bacterias. El TFD en las biopelículas fue más efectivo a medida que se incrementaron las concentraciones del colorante y los tiempos de radiación. El tratamiento más eficaz fue la combinación de las diferentes concentraciones de azul de toluidina O con un tiempo de radiación de 4 min, donde se obtuvo una mayor reducción en los contajes de células con diferencias estadísticamente significativas (P< 0,05) en 4 de las 5 cepas tratadas. El estudio con MEB mostró la presencia de biopelículas con abundante exopolisacárido rodeando las microcolonias, bacilos aislados y agregados y pilis. Se evidenció que las micrografías de MEB correspondientes a las biopelículas tratadas con radiación y con las concentraciones del colorante no presentaron alteraciones, mientras que con la concentración de 200 μg·ml-1 del fotosensibilizador con 4 min de radiación las biopelículas presentaron alteraciones tales como disgregación de exopolisacárido y reducción de la formación de las microcolonias. Estos resultados demuestran que el TFD podría representar en un futuro una opción viable adicional al tratamiento con antimicrobianos para combatir la formación de biopelículas de P. aeruginosa.