EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD HEMAGLUTINANTE Y HEMOLÍTICA DE LAS ESPONJAS MARINAS Niphates erecta (Duchassaing y Michelotti, 1864) Y Callyspongia vaginalis (Lamarck, 1814)

Abstract

RESUMEN: Se evaluó la actividad hemaglutinante y hemolítica de las esponjas Niphates erecta y Callyspongia vaginalis (Porifera, Demospongiae), sobre eritrocitos humanos del sistema ABO(H). Los ejemplares fueron recolectados manualmente en la punta “El Toro”, Parque Nacional Mochima, estado Sucre y sometidos a procesos de limpieza y liofilización. Del producto liofilizado de cada especie se preparó un extracto acuoso, al cual le fueron precipitadas, concentradas, separadas por exclusión molecular las proteínas activas y evaluada su pureza por la técnica electroforética (SDS-PAGE). Para la detección de aglutininas y hemolisinas se prepararon suspensiones sanguíneas al 5% de muestras de sangre humana de los tipos A, B y O, evidenciándose dichas actividades por la formación de grumos o las transformaciones físicas de viscosidad y color de cada una de las muestras, respectivamente. A los extractos acuosos se les determinó la presencia de compuestos de las familias químicas saponinas y polifenoles, arrojando resultados positivos solo para saponinas. Tanto la actividad hemaglutinante como la hemolítica fueron exhibidas por el extracto acuoso y el precipitado de proteínas de ambas esponjas, manteniéndose esta última actividad en el fraccionamiento de las mismas. Las proteínas líticas purificadas, arrojaron masas molares aproximadas de 45 kDa para N. erecta y de menos de 14,3 kDa para C. vaginalis. Estos resultados permiten inferir que la actividad hemaglutinante puede deberse a la presencia de proteínas aglutinantes y que la actividad hemolítica podría atribuirse tanto a las saponinas encontradas en los extractos acuosos, como a las proteínas líticas purificadas del precipitado de proteínas. ABSTRACT: The hemagglutinating and hemolytic activity of the marine sponges Niphates erecta and Callyspongia vaginalis were evaluated on human erythrocytes of ABO(H) system. Specimens were collected manually in Punta "El Toro" Mochima National Park, Sucre State and subjected to cleaning and lyophilization processes. From the lyophilized product of each species an aqueous extract was prepared and the proteins were precipitated, concentrated and separated by molecular exclusion and their purity was assessed by the electrophoretic technique (SDS-PAGE). To detect agglutinins and hemolysins, 5% suspensions of human blood samples of the types A, B and O were prepared, demonstrating these activities by the formation of lumps or physical changes viscosity and color of each sample, respectively. The presence of chemical compounds saponins and polyphenols were determined in the aqueous extracts, yielding positive results only for saponins. Both the hemagglutinating and hemolytic activity were exhibited by the aqueous extracts and the precipitated proteins from both sponges, maintaining the latter activity even after the protein fractioning. The purified lytic proteins yielded an approximate molar mass of 45 kDa for N. erecta and less than 14,3 kDa for C. vaginalis. These results suggest that the hemagglutinating activity could be due to the presence of binding proteins, and that the hemolytic activity could be attributed both to the saponins found in the aqueous extracts and to the lytic proteins purified from protein precipitate.